مهار تکثیر سلول های Calu-6 سرطان ریه با استفاده از shRNA ژن Cdc42

در پژوهش حاضر بیان ژن Cdc42 در سلول های Calu-6 مربوط به کارسینومای ریه با استفاده از سیستم مهاری shRNA کاهش یافته و اثرات این کاهش بر رشد و تکثیر سلولی بررسی شد.
به‫منظور کاهش بیان ژن Cdc42 از مکانیسم مهاری shRNA استفاده شد. سیستم لنتی ویروسی برای رسانش shRNA اختصاصی ژن Cdc42 به سلول های Calu-6 انتخاب شد. لنتی ویروس های نوترکیب به‫کمک لیپوفکتامین و از طریق ترانسفکشن هم‫زمان سه پلاسمید pMD2G، psPAX2 و p-GFP-C-shLenti به‫درون سلول های 293T تولید شد. سلول های Calu-6 تحت تیمار با لنتی ویروس نوترکیب قرار گرفتند. صحت ترانسداکشن با میکروسکوپ فلورسنس مورد بررسی قرار گرفت. بررسی ماندگاری زیستی سلول های Calu-6، با انجام سنجش MTT انجام شد.
بررسی های میکروسکوپ فلورسنس در 48 ساعت پس از ترانسفکشن نشان داد حدود 80 درصد سلول های 293T ترانسفکت شدند.
نتایج میکروسکوپ فلورسنس پس از تیمار سلول های Calu-6 با ویروس نشان دهنده صحت ترانسداکشن این سلول ها است سنجش MTT نیز نشان داد که سرعت رشد سلول های ترانسداکت شده با لنتی ویروس حاوی Cdc42-shRNA در مقایسه با سلول های کنترل، 58 درصد و نسبت به سلول های کنترل منفی 40 درصد کاهش یافت.
لنتی ویروس های نوترکیب، وکتورهای مناسبی جهت انتقال shRNA-Cdc42 به سلول های Calu-6 بوده و این انتقال منجر به کاهش تکثیر سلول های Calu-6 شد. کاهش میزان تکثیر سلول های سرطان ریه به‫واسطه سیستم مهاری لنتی ویروسی- shRNA یک اثر پایدار و طولانی مدت می باشد که می تواند در ژن درمانی این سرطان مورد توجه قرار گیرد.