معرفی ژن های مرجع برای تجزیه و تحلیل یافته های RT-qPCR در اسپرم منجمد نریان

انجماد اسپرم موجب پیشرفتهای زیادی در صنعت پرورش حیوانات اهلی به خصوص از لحاظ انتشار ژنهای برتر شده است و بهبود نگهدارنده ها میتواند موجب افزایش قابل مالحظهای در انتقال و تلقیح اسپرمهای منجمد شود. در این مطالعه، ژنهایی ارزیابی شدند که حتما در اسپرم منجمد شده نریان بیان میشوند و با فراهم کردن تکثیری مناسب، به عنوان ژنهای مرجع در مطالعات آینده بیان ژن استفاده شوند. برای این منظور اسپرمهای زنده و با تحرک باالی 70 درصد، از نمونه های تهیه شده از شش نریان مختلف انتخاب شدند. نمونه های اسپرم برای استخراج محتوی کل mRNA به دو بخش تقسیم شدند، یکی به عنوان نمونه تازه و دیگری پس از انجماد و ذوب مجدد. تکثیر سه ژن منتخب L32 ،actin-β و Ubiquitin ابتدا با روش qPCR-RT انجام و سپس پایداری ژنی با نرم افزارهای GeNorm و BestKeeper محاسبه شد. نتایج نشان داد که بیان ژن L32 در مقایسه با ژنهای actin-β و Ubiquitin پایداری کمتری دارد. نرم افزار GeNorm بهترین ترکیب ژنی را ژنهای actin-β و Ubiquitin معرفی و ارزش پایداری)M)برای بهترین ترکیب ژنی را 083/0 محاسبه کرد. با توجه به نتایج به دست آمده از نرم افزار BestKeeper ،با ثباتترین ژن خانهدار به منظور نرمالسازی داده های بیان ژن در آنالیز نتایج واکنش زنجیرهای پلیمراز در زمان واقعی، ژن actin-β مشخص شد.