ساخت سویه بیانی پیکیا پاستوریس مولد قطعه ی تک زنجیره ای ناحیه ی متغیر آنتی بادی علیه ناحیه خارج سلولی EpCAM

مولکول چسباننده سلول های اپیتلیال (EpCAM) در سطح سلول های توموری اپیتلیال به طور فزاینده ای بیان می شود. بنابراین EpCAM یک آنتی ژن با ارزش در درمان هدفمند محسوب می شود. استفاده از آنتی بادی های منوکلونال رویکردی جذاب در درمان هدفمند سرطان است. محدودیت های آنتی بادی های منوکلونال نظیر اندازه ی بزرگ منجر به توسعه قطعات تک زنجیره ای ناحیه متغیر آنتی بادی (scfv) شد. پیکیا پاستوریس به علت انجام فرایندهای پس از ترجمه و قیمت ارزان به عنوان میزبانی مناسب در بیان پروتئین های نوترکیب در مقیاس بالا مورد توجه است. در این مطالعه، پیکیا پاستوریس بیان کننده scfv علیه قسمت خارج سلولی (EpEX) EpCAM  ساخته شد.

ژن بهینه شده ی کدونی مولد پروتئین anti-EpEX-scfv در سایت های آنزیمی XhoI و XbaI وکتور pPICZαB وارد شد. صحت سازه نوترکیب به کمک توالی یابی و آنالیز آنزیمی تایید شد. سازه نوترکیب با کمک الکتروپوراسیون در سویه GS115 وارد شد. کلون های مثبت با کمک PCR و با به کارگیری سه جفت پرایمر ارزیابی شدند.

صحت سازه نوترکیب با استفاده از آنزیم های HindIII وBamHI  (باندهای 2788 و 1537 جفت باز) هم چنین XhoI و XbaI (باندهای 3506 و 819 جفت باز) تایید شد. کلون های نوترکیب با کمک PCR با مشاهده دو باند (2200 و 1321 جفت باز) زمانی که دو پرایمر AOX استفاده شد، هم چنین یک باند (968 جفت باز) زمانی که پرایمر AOX و پرایمر اختصاصی ژن استفاده شد، تایید شد. هنگامی که دو پرایمر اختصاصی ژن به کار گرفته شد، یک باند (751 جفت باز) مشاهده شد.

 این یافته ها ساخت سویه مهندسی شده را تایید می کند. پروتئین anti-EpEX-scfv می تواند انتخابی مناسب در زمینه ی ایمنی درمانی سرطان باشد.