تولید و بررسی آنتی بادی پلی کلونال موشی علیه انتروتوکسین B استافیلوکوکوس اورئوس

استافیلوکوک اوریوس یک میکروارگانیسم مهم است که با ترشح فاکتورهایی که به عنوان سوپر آنتی ژن استافیلوکوک شناخته می شوند، باعث ایجاد بیماری های مختلف در انسان می شود. انتروتوکسینB  استافیلوکوکوس اوریوس یک آنتی ژن باکتریایی است که مسیول مسمومیت غذایی در انسان می باشد. برای تولید آنتی بادی های پلی کلونال، آنتی ژن مربوطه به یک حیوان حساس تزریق می شود و سرم محتوی آنتی بادی از آن استخراج می شود. سوپر آنتی ژن های باکتری که فعال کننده سلول های T قوی هستند می توانند بر روی سیستم عصبی مرکزی اثرات حاد یا مزمن داشته باشند. این تحقیق با هدف تولید آنتی بادی پلی کلونال موشی علیه انتروتوکسین B استافیلوکوکوس اوریوس انجام شده است.

برای تعیین غلظت پروتئین از روش بردفورد استفاده شد. برای ارزیابی و شناسایی آنتی ژن، نمونه ها از ژل SDS-PAEG بر روی غشاء نیترو سلولزی انتقال داده شد و توسط وسترن بلات آنالیز صورت گرفت. ایمن سازی موش ها در فواصل صفر، دو هفته و چهار هفته به صورت تزریق داخل صفاقی انجام شد. تیتر آنتی بادی در آنتی سرم جدا شده از حیوان به روش الایزا اندازه گیری شد.

غلظت های مختلف پروتئین (32-0 میکروگرم) با جذب های مختلف با فرمول y = 0.0279x + 0.1222 محاسبه شد. در ژل آکریل آمید پروتئین باند اضافه دیده نشد. در تجزیه و تحلیل وسترن بلات باندهای حاصل همگی بیانگر تطابق کامل با نمونه استاندارد بوده و عاری از هر گونه پروتئین ناخواسته بود. نتایج آزمایش الایزا در نوبت دوم در 0/05> P معنی دار بود. در آزمایش دابل دیفیوژن بین نمونه شاهد و آنتی ژن باند وجود داشت.

توکسویید تهیه شده خاصیت کشندگی خود را به طور کامل از دست داده و بنابراین می تواند برای ایمن سازی و تولید آنتی بادی پلی کلونال علیه انتروتوکسینB  استافیلوکوکوس استفاده شود.