ایجاد تغییر در ساختار اولیه گلیکوپروتئین ویروس هاری و جایگزین کردن آن در ساختار ویروس هاری با روش ژنتیک معکوس

 هاری یک بیماری زیونوز کشنده و عامل مولد آن ویروس هاری با ژنوم RNA تک رشته ای است. این ویروس می تواند سیستم اعصاب مرکزی فرد مبتلا   به هاری را آلوده و مختل سازد. گلیکوپروتئین (G) مهمترین پروتئین در اتصال ویروس به گیرنده های سلولی و همچنین ایجاد پاسخ ایمنی بر ضد ویروس در میزبان است. با استفاده از فناوری ژنتیک معکوس می توان تغییراتی در ژن کدکننده گلیکوپروتئین ویروس ایجاد و ویروسی با توان ایمنی زایی بالاتر و یا بیماری زایی کمتر تولید کرد. 

در این پژوهش با کمک نرم افزار در توالی ژنتیکی گلیکوپروتئین ویروس هاری سویه پاستور جهشی در سایت آنتی ژنیک اصلی II، در موقعیت اسیدهای آمینه 42-34 طراحی گردید و پس از سنتز، ژن تغییر یافته تعیین توالی گردید و نوکلیوتید جهش یافته تایید شد. سازه حاوی ژن تغییریافته بوسیله دو آنزیم محدودالاثر جایگزین ژن اصلی در ژنوم ویروس هاری شد و کلون گردید. سلول T7-BHK تحت پروموتر فاژ T7 برای بیان ژن گلیکوپروتئین، همزمان با سازه ژنی و وکتورهای بیان کننده ژن های N, P و L ویروس هاری و فول ژنوم ترنسفکت شد. پس از بیان ژن های ویروسی و تایید آن، در سلول BSR کشت داده شد.

بازیابی ویروس نوترکیب حامل ژن جهش یافته گلیکوپروتئین، پس ازکلون شدن و ترنسفکت در سلول T7-BHK، در سلول BSR کشت و تکثیر پیدا کرد و پس از استخراج ژنوم آن از سلول، بوسیله تعیین توالی تایید نهایی گردید.

با بررسی بر روی توان ایمنی زایی یا کاهش قدرت بیماریزایی و همچنین حفظ یا افزایش آنتی ژنیسیته ویروس نوترکیب بازیابی شده می توان از آن جهت مطالعات تحقیقاتی در ساخت واکسن بهره جست.