سنجش آمینواسیدهای آزاد در نمونه های خاک و کود با استفاده از کروماتوگرافی مایع با عملکرد بالا مجهز به آشکارساز فرابنفش

در این پژوهش غلظت آمینواسیدهای آزاد موثر در متابولیسم گیاهی، در نمونه های مختلف خاک و کود به روش کروماتوگرافی مایع با عملکرد بالا مجهز به آشکارساز فرابنفش اندازه گیری شد. ابتدا آمینواسیدها با هیدروکلریک اسید 1/0 نرمال استخراج شدند. سپس با فنیل ایزوتیوسیانات (PITC) مشتق سازی شد. در نهایت، مشتقات فنیل تیوکاربامیل-آمینواسید در ستون فاز معکوس با استفاده از شویش گرادیانی با بافر سدیم استات تری هیدرات و استونیتریل-آب (40:60] حجمی/حجمی [) جداسازی، و توسط آشکارساز UV در طول موج 254 نانومتر آشکارسازی شد. چندین پارامتر موثر بر جداسازی پیک آمینواسیدها از جمله pH و دمای فاز متحرک، غلظت بافر و اصلاح کننده (تری اتیل آمین) در فاز متحرک مورد مطالعه قرار گرفتند. با تغییر هر یک از شرایط موجود میزان تفکیک هر یک از آمینواسیدها بهینه سازی شد. تحت شرایط بهینه، گستره خطی خوبی در محدوده خطی mol/mlµ 125/0 - 0312/0 برای 17 آمینواسید با حد تشخیص mol/mlµ 0094/0 و تکرار پذیری قابل قبولی برای هر یک از آمینواسیدها به دست آمد (%1/6 RSD ≤). در نهایت با این روش درصد آمینواسیدهای آزاد در نمونه های مختلف خاک و کود اندازه گیری شد.