همسانه سازی و بیان ژن پروتئین پوششی ویروس PVX در باکتری به منظور تولید حامل داروهای ضد سرطان

استفاده از ویروسهای گیاهی به عنوان حاملهای داروهای ضد سرطان در پزشکی روز به روز درحال افزایش است. تشخیص ویروس ها با استفاده از آنتی بادی های اختصاصی نیز اهمیت ویژه ای برای کنترل بیماری های گیاهی خصوصا در برنامه تولید بذر سیب زمینی دارد. یکی از مهمترین ویروس های سیب زمینی (PVX)  Potato X Potexvirus  با گستره جهانی و جزو اولین ویروسهای گیاهی مورد استفاده به عنوان حامل داروهای ضد سرطانی می باشد. در این تحقیق به منظور تولید پیکره های  PVX، ژن Coat protein (CP) آن بصورت نوترکیب تولید گردید. ابتدا، واکنش  RT-PCRبا استفاده از آغازگر های اختصاصی حاوی سایت برشی برای تکثیر CP انجام گرفت. الکتروفورز محصول PCR بر روی ژل آگارز، قطعه تکثیر شده به طول bp 714 را تایید کرد. ژن CP و پلاسمید  pGBKT7 توسط آنزیم های  BamHIو EcoRI برش داده شدند و پس از خالص سازی لیگاسیون بین آنها صورت گرفت. پلاسمید نوترکیب pGBKT7 -CPPVX با الکتروپوراسیون به باکتری E. coli منتقل و در آن تکثیر گردید. پس از گزینش باکتری های حاوی پلاسمید نوترکیب به کمک PCR و استخراج پلاسمید از آنها، توالی یابی درست بودن توالی ژن کلون شده را تایید کرد. در ادامه ژن CP در پلاسمید بیانیpET-21a به روش برش و لیگاسیون همسانه سازی شد. پلاسمید نوترکیب به سویه BL21 باکتری E. coli منتقل و کشت گردید. با اضافه کردن IPTG در محیط کشت باکتری تولید پروتئین CP از روی پلاسمید انجام و پروتئین های باکتری استخراج شد. الکتروفورز پروتئین، بیان شدن CP را نشان داد. این پروتئین پس از خالص سازی میتواند به عنوان حامل داروهای ضد سرطان کاربرد داشته باشد.