تعیین گونه های انگل کریپتوسپوریدیوم با استفاده از آنالیز PCR-RFLP ژن 18srRNA

کریپتوسپوریدیوم یکی از مهمترین انگل های پاتوژن روده ای است که سبب اسهال در انسان و حیوانات می شود. در افراد با سیستم ایمنی کارآمد عفونت ناشی از انگل خودبخود بهبود می یابد اما در اشخاص مبتلا به نقص سیستم ایمنی عفونت ناشی از انگل طولانی مدت بوده و می تواند منجر به مرگ این افراد شود. به دلیل اهمیت بیماری مذکور و تاثیر تنوع گونه های انگل در طراحی استراتژی های کنترل بیماری، ایزوله های انسانی و حیوانی کریپتوسپوریدیوم جهت تعیین نوع گونه ها با استفاده از روش PCR -RFLP مورد بررسی قرار گرفتند.
در این بررسی نمونه های مدفوع انسانی و دامی جمع آوری شده از نقاط مختلف استان اصفهان با استفاده از روش های آزمایشگاهی ویژه مورد بررسی و تخلیص قرار گرفتند و در نهایت بر روی DNA استخراج شده از ایزوله ها عملیات PCR - RFLP انجام گردید. جهت تعیین هویت گونه های انگلی شناسایی شده عملیات تعیین توالی ژنوم (sequencing) بر روی ژن 18s rRNA انجام شد. نتایج بررسی های میکروسکوپی نشان داد که 4.7 درصد از نمونه های انسانی و 6.2 درصد از نمونه های دامی آلوده به انگل هستند. نتایج PCR - RFLP نشان داد که نمونه های مورد آزمایش آلوده به Cryptosporidium parvum II، C. baileyi، C. serpentis، C. muris، C. wrairi و سه ژنوتیپ جدید کریپتوسپوریدیوم می باشند. با انجام تعیین توالی هویت واقعی این گونه های انگلی تعیین شد.
با توجه به الگوی PCR - RFLP ژن 18s rRNAایزوله های انسانی و حیوانی در اثر هضم آنزیمی با آنزیم های برش دهنده SpeI و SspI می توان نتیجه گرفت که در استان اصفهان اکثر ژنوتیپ های کریپتوسپوریدیوم به ویژه C. parvum وجود دارد. همچنین ممکن است تغییرات شدید پلی مرفیک در انگل های کریپتوسپوریدیوم این منطقه وجود داشته باشد و یا موتانهایی از این جنس نیز در منطقه وجود داشته باشند که الگوهای متفاوتی را ایجاد می کنند و پی بردن به هویت این موتانها نیاز به تعیین توالی ژنوم آنها دارد. علاوه بر این وجود سویه های دامی در ایزوله های به دست آمده از انسان تداخل سیکل انسان – دام - انگل و اهمیت سویه های دامی را در کنار سویه های انسانی در منطقه نشان می دهد.