جداسازی و کشت جزایر لانکرهانس موش صحرایی و ارزیابی میزان حیات آنها

مطالعات متعددی جهت بررسی پیوند پانکراس به عنوان روشی نسبتا قطعی در درمان دیابت نوع 1 انجام می شوند. از آنجا که میزان حیات جزایر برای پروگنوز پیوند مهم می باشد، در مطالعه حاضر مراحل لازم برای تهیه جزایر سلولی جهت پیوند در رت، انجام شده است. هدف از انجام این مطالعه ارزیابی میزان حیات مجموعه جزایر بدست آمده در روزهای مختلف و در نهایت پیشنهاد زمان مناسب جهت پیوند می باشد.
پانکراس رت جدا شده، بعد از Chopping، توسط کلاژنازV برای مدت 20 دقیقه در دمای 37oC 37oC هضم شده و 3 بار سانتریفوژ شد.
سپس جزایر زیر میکروسکوپ جدا شده و در محیط کشت RPMI1640 در دمای 37oC، برای 6 روز انکوبه شدند. هر Well حاوی 45-35 جزیره بود. میزان حیات جزایر پانکراس با ارزیابی میزان رنگ پذیری آنها با Acridine Orange / Propiodine Iodide و بررسی زیر میکروسکوپ فلورسنت تعیین گردید که در ساعت های 0، 24، 48 و روزهای 3 و 5 و 6 انجام پذیرفت.
میزان حیات پس از انکوباسیون به تدریج افزایش می یابد تا به حداکثر میزان خود در روز دوم می رسد. پس از آن میزان حیات سلول ها هستیم سیر نزولی را طی می کند به طوری که در روزهای 5 و 6 به شدت کاهش یافته و به حدود صفر می رسد.
وضعیت حیاتی سلول های جزیره ای پانکراس پس از جداسازی و تخلیص بدنبال کشت در محیط مناسب بهبود می یابند، به طوری که این سلول ها بهترین آمادگی جهت پیوند را پس از 48 ساعت انکوباسیون بعد از جداسازی از محیط بدن دارند.