جداسازی و کلونینگ ژن فولیکول استیمولایتینگ هورمون انسانی hFSHb با سیگنال سکانس طبیعی ژن در شاتل وکتور pPIC9 مخمر متیلوتروف Pichia pastoris

فولیکول استیمولاتینگ هورمون (FSH) از خانواده هورمون های گلیکوپروتئینی هیپوفیز و متشکل از دو زیر واحد آلفا و بتا می باشد که فعالیت بیولوژیک این هورمون مربوط به زیر واحد بتای آن است. این مطالعه به منظور جداسازی ناحیه کدکننده ژن انسانی FSHb با سیگنال سکانس طبیعی ژن و کلونینگ آن در شاتل وکتور pPIC9 تحت پروموتر AOXI و سیگنال سکانس آلفا فاکتور انجام شد.
طی دو مرحله امپلیفیکاسیون و کلونینگ از روی ژنوم یک زن سالم، این ژن به صورت یک قطعه 2kb با بازسازی ناحیه ''5 قبل از کدون شروع جدا و اکسپرشن وکتور pPIC9-F1 ساخته شد.
هضم آنزیمی و سکانسینک ساختار و ترادف صحیح ژن FSHb با حفظ نواحی اسپلایسینگ را در pTV-2019 نشان داد. Restriction analysis و PCR با پرایمرهای AOXI نشان داد. pPIC9F1 دارای ساختار صحیح می باشد.
وکتور نوترکیب pPIC9F1 ساخته شده در این مطالعه شامل ناحیه کدکننده ژن و سیگنال طبیعی آن FSHb(+sig E2-IVS2-E3) بوده که قادر است این ژن را در ژنوم مخمر تحت پروموتر AOXI وارد کند، که در این حالت فیوژن پروتئینی شامل سیگنال پپتید آلفا فاکتور - سیگنال پپتید FSH به وجود می آید. FSHb به نحوی بیان خواهد شد که سیستم مخمری قادر به جداسازی آلفا فاکتور باشد. به نظر می رسد این نخستین تلاش برای کلونینگ ژن انسانی FSHb در سیستم مخمری باشد.