انتقال ژن بتاگلوکورونیداز (GUS) به کلروپلاست کاهوی (Lactuca sativa) ایرانی

انتقال ژن به کلروپلاست گیاهان دارای مزایای زیادی مانند بیان بالای ژن خارجی و عدم آلودگی زیست محیطی می باشد. با توجه به توالی یابی ژنوم پلاستید کاهو می توان از قطعات همولوگ زیادی برای طراحی یک ناقل مختص گونه استفاده کرد. ما در این تحقیق از قطعات همولوگ rbcL و accD (برگرفته از ژنوم کلروپلاست کاهو)، راه اندازprrn، خاتمه دهندهpsbA و کاست ژنی مقاومت به آنتی-بیوتیک های استرپتومایسین و اسپکتینومایسین برای ساخت یک ناقل مختص گونه استفاده نمودیم و پس از توالی یابی، ناقل ساخته شده به نام pCL96-39(پلاسمید کلروپلاستی (Lactuca sativa) رقم TN-96-39 ایرانی) نامگذاری شد. جهت بهینه سازی انتقال ژن به کلروپلاست کاهوی ایرانی ژن بتاگلوکورونیداز (1800 جفت باز) پس از همسانه سازی در ناقل pCL96-39 با استفاده از تفنگ ژنی به کلروپلاست گیاه کاهو منتقل شد. وجود ژن بتاگلوکورونیداز در ژنوم پلاستید با استفاده از PCR تایید شد و جهت تایید بیان ژن، آزمون هیستوشیمیایی بتاگلوکورونیداز (GUS) برروی کالوس ها و ساقه های تراریخته انجام شد. تولید پروتئین بتاگلوکورونیداز در گیاهان تراریخته به وسیله روش الکتروفروز SDS-PAGE نیز تایید شد. نتایج این پژوهش می تواند راه را برای تولید وسیع پروتئین های پلاسما، آنزیم ها، فاکتورهای رشد، واکسن ها و آنتی بادی های نوترکیب در گیاه کاهوی ایرانی هموار کند.