شناسایی گروه غالب ویروس اس سیب زمینی (PVS) در ایران و بیان ژن پوشش پروتئینی آن

بیان ژن ویروس ها در باکتری برای مطالعه پروتئین ویروس ها و تولید آنتی بادی اختصاصی مورد استفاده قرار می گیرد. در این پژوهش، نمونه های سیب زمینی از هشت استان ایران جمع آوری شده و ردیابی ویروس Potato virus S، به عنوان یکی از مخرب ترین ویروس های سیب زمینی، بوسیله داس-الیزا و آرتی-پی سی آر انجام گرفت. تعیین گروه غالب با توجه به توالی ژن پوشش پروتئینی و پس از تجزیه فیلوژنی انجام شد. ژن کامل CP تکثیر و همسانه سازی شده و مورد توالی یابی قرار گرفت، سپس از پلاسمید pJET1.2/blunt برش داده شده و به پلاسمید بیان pET-28a (+) متصل شد و سازه (pET-28a:PVS:CP) به باکتری Escherichia coli سویه BL21 منتقل شد. بهینه سازی بیان ژن با القا بوسیله IPTG در غلظت های 5/0، 1 و 2 mM به مدت 3، 4 و 6 ساعت انجام گرفت و توسط SDS-PAGE و وسترن بلات تایید شد. بر اساس توالی نوکلئوتیدی، جدایه های ایرانی PVS به سه گروه تقسیم شدند که یک گروه با 22 عضو به عنوان گروه غالب شناخته شد. بیان پروتئین نوترکیب با وزن 34 کیلودالتون توسط وسترن تایید شد. القاء با غلظت 1 میلی مولار IPTG و به مدت 4 ساعت بهترین بیان را نشان داد. این نخستین گزارش بیان ژن پوشش پروتئینی ویروس PVS است که برای تهیه آنتی بادی این ویروس اهمیت دارد.