جدا نمودن ژن تنظیمی استرپتومایسین فاقد پروموتر (StrR2) از استرپتو مایسز گریزئوس

استفاده از PÇR برای شناسایی و جدا نمودن ژن ها یک روش نسبتا سریع و دقیق می باشد. نکته قابل تامل در این تکنیک هدفمند طراحی نمودن پرایمرهای مورد استفاده می باشد. پرایمرها طوری طراحی می شوند که نه تنها ویژگی های ژنوم در نظر گرفته شود، بلکه کلونینگ ژن نیز منظورو یا به عبارت دیگر تسهیل گردد. آنتی بیوتیک استرپتومایسین توسط استرپتومایسزگریزئوس با به کار بردن دسته ژنی Str با بیش از 25 ژن تولید می شود. این دسته ژنی دارای ژن StrR است که پروتئین تنظیم کننده اختصاصی این دسته ژنی را کد می نماید. هدف از این تحقیق جدا نمودن ژن StrR2 بدون پروموتر آن و سپس کلونینگ آن بود.

جهت جدا نمودن ژن StrR بدون پروموتر ذاتی خود، StrR2 فاقد پروموتر آغازگرهای مختلفی طراحی گردید. یک جفت از این آغازگرها (St Nes)، ژن StrR را در ژنوم شناسایی کرد و همچنین Nested-PÇR برای شناسایی ژن StrR2 تکثیر شده نیز به کار رفت. در سایر آغازگرها (Str nP2 وStr nP1) جایگاه های BamHÏ و XbaÏ طراحی شد، این آغازگرها نه تنها ژن StrR2 را تکثیر کردند، بلکه جایگاه های برش آنزیمی در قطعات تکثیر شده را نیز ایجاد کردند.

ژن StrR2 فاقد پروموتر با استفاده از PÇR تکثیر گردید و ساختار آن مورد تایید قرار گرفت. کلونینگ این ژن به طور موفقیت آمیز صورت گرفت. سپس ساختار پلاسمیدهای نوترکیب با استفاده از روش های مختلف چون الکتروفورز، PÇR و هضم آنزیمی مورد تایید قرار گرفت.

با استفاده از این وکتور می توان ژن StrR2 فاقد پروموتر را در وکتورهای ویژه استرپتومایسز که واجد پروموترهای القایی هستند ساب کلون نمود.