تشخیص انگل لیشمانیا در بیماران توسط کشت NNN و PCR-RFLP

لیشمانیوز یک بیماری عفونی انگلی با انتشار وسیع در مناطق معتدله و گرمسیری است. هدف این مطالعه به کار گیری دو روش PCR-RFLP و کشت NNN (Novy-Nicol-Mac Nea) در نمونه هایی بود که اسمیر مستقیم آن ها از نظر وجود آماستیگوت منفی بود.

این مطالعه جهت بررسی و تعیین گونه های Leishmania در منطقه ی اصفهان بر روی DNA استخراج شده از انگل های حاصل از کشت بیماران اسمیر منفی با روش PCR-RFLP (Polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism) انجام شد. جهت کشت انگل مقداری از نمونه ی برداشت شده از بیمار بر روی محیط NNN و RPMI 1640 برده شد. از مجموع 100 نمونه اسمیر منفی 50 نمونه در محیط کشت از نظر پزوماستیگوت های انگل Leishmania مثبت شد و DNA حاصل از کشت نمونه ها استخراج گردید. بعد از استخراج DNA با استفاده از روشPCR-RFLP تکثیر از توالی ITS1 با پرایمرهای اختصاصی صورت گرفت و بعد از هضم با آنزیم HaeIII ایزوله ها در مقایسه با سویه های استاندارد تعیین گونه شدند.

از مجموع 50 نمونه ی اصفهان 46 نمونه L.major و 4 نمونه L.tropica تشخیص داده شد.

مطالعه ی حاضر نشان داد که PCR-RFLP روشی حساس و دقیق برای تعیین گونه های عامل لیشمانیوز جلدی است و ضایعات مورد مطالعه در منطقه ی اصفهان ناشی از L.major و L.tropica می باشد.