نقش اسید رتینوئیک و بستر آستروسیت در تمایز سلول های بنیادی هیپوکامپ

سلول های بنیادی،سلول هایی چند استعدادی می باشند که از نواحی متفاوتی از بدن یک موجود زنده استخراج می گردند. این سلول ها در محیط کشت با استفاده از فاکتورهای متفاوت رش و لایه تغذیه کننده سلولی قابلیت تکثیر و تمایز برای مدت زمان طولانی را دارا می باشند لایه تغذیه کننده سلولی آستروسیت که با استفاده از فاکتور سیتوزین آرابینوزید غیر فعال گردیده قابلیت تمایز سلول های بنیادی کشت داده در سطح خود را به دیگر سلول ها دارا می باشد0 هدف اطلی این پژوهش تمایز سلول های بنیادی هیپوکامپ با استفاده ازاین لایه مغزی و فاکتورهای رشد اسید رتینوئیک وایزومر آن 9- RAcis به سلول های تولید کننده اپسین است. در این تحقیق ازجنین 18 روزه موش نژاد اسپراگوداولی استفاده شد0 در روز 18 مادر سزارین و مغز جنینها خارج بلافاصله داخل محلول HBSS قرار داده شد سپس با استفاده از روش Banker هیپوکامپ ها را جدا شد و با روش Fishbach سلولهای آن جداگردید. سلولهای به دست آمده در داخل فلاسک 25cm2 کشت داده شد، بعد از 3 روز سلولها را با استفاده از تریپسین از کف فلاسک جدا ودر دو مقدار با دانسیته بالا200000 و دانسیته پائین 20000 سلول در داخل پلیت 6 خانه، کشت داده شد منتها قبل از انتقال سلولها کف رولهای پلیت را یک ردیف با Poly L lysin و ردیف دیگر را با آستروسیتهای غیر فعال پوشش دادیم. مدت 4 روز سلولها در محیط کامل DMEM/F12 و %10 FBS نگهداری نموده و سپس به مدت 6 روز دوزهای متفاوتATRA و RAcis-9 به چک های پلیتهااضافه گردید.در پایان با استفاده از منوکلونال آنتی بادی سلولها بررسی شدند. بعد از مدت6 روزاضافه کردن فاکتورهای فوق به سلول های موجود درهر چاهک پلیت محیط کشت بودن دوز100nM از9 -RAcis و 500nM از ATRA بیشترین سلولهای تمایز یافته به دست آمد و در پلیتهائی که ازبستر پلی ایزین به عنوان لایه مغزی استفاده شدتمایزی مشاهده نگردید. همچنین تمایزدردانسیته سلولی بیشتر از دانسیته پایین بوده است. بستر آستروسیت و فاکتورهای خارجی مانندایزومرهای اسید رتینوئیک قابلیت تمایز سلولهای بنیادی هیپوکامپ به سلول های تولید کننده اپسین را دارا می باشند.